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1510年，佩德罗·纳瓦罗（Pedro Navarro），即奥利韦托伯爵（Count of Oliveto）为西班牙征服了这座城市。
1530年，的黎波里连同马耳他（Malta）一起被分配给圣约翰骑士团（Knights of St. John，医院骑士团），该团此前曾被奥斯曼人从他们在罗德岛（Rhodes）的据点驱逐出去（前文库尔托奥卢章节）。
身处敌对的领土，骑士团加强了城墙并建造了防御工事。
尽管这些防御设施是建在旧建筑（可能包括罗马的公共浴场）之上，的黎波里城堡（Tripoli castle，即“红堡” [Red Castle]）的早期防御结构大部分都归功于圣约翰骑士团。
骑士团之前曾在罗德岛的基地打击海盗，他们接管了这座城市，以防止其再次落入巴巴里海盗之手。
海盗对地中海基督教航线的破坏是西班牙征服这座城市的主要动机之一。
骑士团一直控制着该城，直到1551年的黎波里围城战（Siege of Tripoli），他们向奥斯曼帝国投降，指挥官为穆斯林将领图尔古特·雷伊斯（Turgut Reis）。
图尔古特·雷伊斯（Turgut Reis）担任的黎波里的帕夏（Pasha），在他的统治下，他美化并发展了这座城市，使其成为北非海岸最令人印象深刻的城市之一。
图尔古特（Turgut）于1565年去世后，被安葬在的黎波里。
他的遗体从马耳他——他在奥斯曼围攻该岛期间阵亡的地方——被带回，葬在他在的黎波里宫殿附近建立的西迪·达尔古特清真寺（Sidi Darghut Mosque）中的陵墓。
