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同年,法国国王弗朗西斯一世在哈布斯堡王朝的包围下,发动了意大利战争,导致了1525年的帕维亚战役(Battle of Pavia)。
1527年,查理的叛乱士兵洗劫了罗马。
查理随后保卫维也纳免受奥斯曼人侵袭,并从教皇克莱门特七世那里获得了意大利国王和神圣罗马帝国皇帝的加冕典礼。
1535年,他占领米兰并攻陷突尼斯。
然而,在 1540 年代初期争夺匈牙利和阿尔及尔远征期间失去布达,使他的反奥斯曼政策受挫。
经过多年谈判,查理与教皇保罗三世达成协议,组织了特伦特公会议(1545年)。
路德教徒施马尔卡尔迪联盟(Schmalkaldic League)拒绝承认该公会议的有效性,导致了一场战争,查理赢得了胜利。
然而,法国的亨利二世为路德教事业提供了新的支持,并加强了与苏莱曼大帝的法土联盟。